【摘要】目的探討多藥耐藥相關(guān)蛋白在不同卵巢上皮癌組織中的表達(dá)及與卵巢上皮癌化療效果的關(guān)系。方法采用SP免疫組化方法聯(lián)合檢測(cè)多藥耐藥相關(guān)蛋白P-糖蛋白(P-gp)、谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶-π(GST-π)、肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)等在36例卵巢上皮癌組織中的表達(dá)情況，取同期卵巢良性腫瘤及交界性腫瘤各10例作為對(duì)照組。結(jié)果卵巢上皮癌組織P-gp、GST-π和LRP陽(yáng)性表達(dá)率與良性和交界性腫瘤之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)，良性與交界性腫瘤之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。P-gp和LRP在卵巢上皮癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率隨其臨床分期及病理分級(jí)的升高而升高(P<0.01);GST-π的陽(yáng)性表達(dá)率在臨床分期I～I(xiàn)I期與III～I(xiàn)V期之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但在病理分級(jí)G1、G2與G3之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。P-gp、GST-π和LRP在卵巢上皮癌的陽(yáng)性表達(dá)率與化療療效呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論卵巢上皮癌組織中存在原發(fā)的多個(gè)耐藥相關(guān)蛋白共同表達(dá)的現(xiàn)象，聯(lián)合檢測(cè)卵巢上皮癌組織多藥耐藥相關(guān)蛋白，對(duì)化療藥物的選擇及預(yù)后判斷有一定臨床指導(dǎo)價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】卵巢癌 耐藥 P-糖蛋白 谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶 肺耐藥相關(guān)蛋白 免疫組織化學(xué)

腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥是多種耐藥基因參與的結(jié)果。化療是卵巢上皮癌主要輔助治療方法，了解卵巢上皮癌耐藥基因的表達(dá)，對(duì)選擇合適治療方案和實(shí)施有效的逆轉(zhuǎn)措施具有重要意義。本文通過(guò)檢測(cè)多藥耐藥相關(guān)蛋白P-糖蛋白(P-gp)、谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶-π(GST-π)、肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)在卵巢上皮癌組織中的表達(dá)，探討其對(duì)化療藥物的選擇及預(yù)后判斷的臨床指導(dǎo)價(jià)值。

1、材料與方法

1.1 臨床資料 2002年1月-2004年12月我院婦產(chǎn)科收住卵巢上皮癌患者36例，年齡27～69歲，平均(51±8)歲。36例均為初次手術(shù)，行卵巢癌分期手術(shù)或腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)前未接受任何治療，所有標(biāo)本均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)，其中漿液性囊腺癌18例，黏液性囊腺癌10例，子宮內(nèi)膜樣癌8例。病理分級(jí)：Ⅰ級(jí)7例、Ⅱ級(jí)11例、Ⅲ級(jí)18例。FIGO分期(1986)：Ⅰ期7例、Ⅱ期4例、Ⅲ期22例、Ⅳ期3例。血CA125均>35U•mL-1，其中11例>500U•mL-1，術(shù)后輔助PC或TP方案化療，定期來(lái)院隨診檢查或電話(huà)隨訪32例，失訪4例。隨訪時(shí)間54～90個(gè)月，隨訪內(nèi)容包括臨床癥狀、婦檢、血CA125、超聲檢查或MRI檢查等。取同期卵巢良性腫瘤及交界性腫瘤各10例為對(duì)照組。

1.2 方法 標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm切片，分別行HE染色核實(shí)診斷和SP法免疫組化方法。試劑盒由福州邁新公司提供，鼠抗人P-gp、GST-π和LRP為美國(guó)Maix公司產(chǎn)品，為即用型抗體。染色步驟按操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行DAB顯色，PBS代替一抗作陰性對(duì)照，相同染色條件下已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司提供的惡性腫瘤多藥耐藥免疫組化檢測(cè)耐藥判斷標(biāo)準(zhǔn)，在低倍鏡(10×10)視野下選擇陽(yáng)性細(xì)胞密度最大的區(qū)域，然后在高倍鏡(10×40)下計(jì)數(shù)500個(gè)腫瘤細(xì)胞的陽(yáng)性個(gè)數(shù)，連續(xù)5個(gè)視野，腫瘤細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、胞核、核膜出現(xiàn)黃棕色顆粒為陽(yáng)性，不染色為陰性。計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比，陽(yáng)性以“+”表示，陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率<10%為陰性，10%～25%為“+”，26%～75%為“++”，>75%為“+++”。

1.3 臨床化療 療效判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)化療反應(yīng)的評(píng)價(jià)參考WHO標(biāo)準(zhǔn)，觀察3個(gè)療程。臨床完全緩解(CR)：臨床癥狀消失，盆腔檢查及超聲檢查均無(wú)包塊，血清CA125值下降至正常;臨床部分緩解(PR)：臨床癥狀消失，病灶縮小>50%，無(wú)疾病進(jìn)展表現(xiàn)，血清CA125較術(shù)前明顯下降，但未達(dá)正常;臨床無(wú)效(NR)：臨床癥狀存在，病灶縮小≤50%，盆腔檢查有包塊，病灶增大或復(fù)發(fā)，血清CA125值未下降或下降后又再升高，或病情在3個(gè)月內(nèi)急劇加重，視為無(wú)效。CR及PR視為臨床治療有效，NR視為臨床治療無(wú)效。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及四格表確切概率法分析。

2、結(jié)果

2.1 P-gp、GST-π和LRP在不同性質(zhì)卵巢上皮腫瘤組織中的表達(dá)。P-gp、GST-π和LRP在不同性質(zhì)卵巢上皮腫瘤組織中的表達(dá)(例數(shù)，%)

交界性腫瘤組各指標(biāo)陽(yáng)性表達(dá)率與良性腫瘤組比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2P-gp確切概率法，χ2GST-π0.392，χ2LRP確切概率法，均P>0.05);卵巢上皮癌組與良性腫瘤組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2P-gp確切概率法，χ2GST-π17.17，χ2LRP確切概率法，均P<0.01);卵巢上皮癌組與交界性瘤組比較各指標(biāo)陽(yáng)性表達(dá)率亦均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2P-gp8.18，χ2GST-π13.06，χ2LRP10.13，均P<0.01)。

2.2 P-gp、GST-π和LRP在不同臨床分期及病理分級(jí)的卵巢癌組織中的表達(dá)。P-gp、GST-π和LRP在不同臨床分期及病理分級(jí)的卵巢癌組織中的表達(dá)(例數(shù)可見(jiàn)，P-gp和LRP在卵巢上皮癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率隨著其臨床分期及病理分級(jí)的升高而升高(P<0.01)，GST-π的陽(yáng)性表達(dá)率亦隨臨床分期升高而增高(P<0.01)，但GST-π在各個(gè)病理分級(jí)的陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 P-gp、GST-π和LRP在卵巢癌組織中表達(dá)與化療療效的關(guān)系。

可見(jiàn)，在卵巢癌患者中，P-gp、GST-π和LRP表達(dá)陽(yáng)性組，其化療有效率低于表達(dá)陰性組(P<0.05)，三種多藥耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率與化療有效率呈負(fù)相關(guān)。

3、討論

卵巢癌是嚴(yán)重威脅婦女健康的惡性腫瘤，目前對(duì)卵巢癌的治療原則仍以手術(shù)為主，輔以化療綜合治療。以鉑類(lèi)為主的聯(lián)合化療提高了卵巢癌患者的總體反應(yīng)率、臨床緩解率和中位生存率，但隨之而來(lái)的腫瘤細(xì)胞的原發(fā)性和(或)獲得性多藥耐藥現(xiàn)象成為臨床治療的障礙。卵巢癌耐藥是臨床治療最為棘手的問(wèn)題，因此，探索耐藥機(jī)制是解決耐藥問(wèn)題、改善化療效果的關(guān)鍵^①。多藥耐藥是惡性腫瘤存在的普遍現(xiàn)象，其耐藥機(jī)制是復(fù)雜的，是多種基因共同參與的結(jié)果。膜藥物排流泵對(duì)藥物的主動(dòng)排出、腫瘤細(xì)胞解毒能力的增強(qiáng)以及藥物靶酶活性的改變均構(gòu)成了腫瘤細(xì)胞耐藥的分子基礎(chǔ)。表3P-gp、GST-π和LRP在卵巢癌組織中表達(dá)與化療的療效關(guān)系(例)

化療P-gp陽(yáng)性陰性GST-π陽(yáng)性陰性LRP陽(yáng)性陰性有效9111471010無(wú)效133150142χ2值4.92—5.63P值<0.050.03<0.05P-gp是多藥耐藥基因MDR的表達(dá)產(chǎn)物，為一能量依賴(lài)型藥泵，能將多種結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的天然藥物如多柔比星、紫杉醇、長(zhǎng)春新堿類(lèi)藥物排出細(xì)胞外，使胞內(nèi)藥物蓄積濃度下降，從而阻礙化療藥物作用的發(fā)揮，其表達(dá)水平與耐藥程度成正相關(guān)^①。本研究結(jié)果提示隨著卵巢上皮癌手術(shù)分期及病理分級(jí)的升高，P-gp的陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，而P-gp表達(dá)越高，其化療有效率越低。表明P-gp在卵巢上皮癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程及原發(fā)性耐藥機(jī)制中有一定作用。因此，P-gp可作為卵巢上皮癌預(yù)后的一個(gè)預(yù)測(cè)指標(biāo)。

GST-π是谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶的一個(gè)亞類(lèi)。腫瘤細(xì)胞解毒能力的增強(qiáng)，使化療藥物在細(xì)胞內(nèi)失活是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥的另一重要機(jī)制。有學(xué)者研究認(rèn)為，在耐藥發(fā)生的早期階段，GST-π非特異性的結(jié)合作用可協(xié)助藥物通過(guò)P-gp形成的藥物排流泵而外流，從而使之代謝解毒，GST-π與P-gp共同介導(dǎo)了早期耐藥的產(chǎn)生。有學(xué)者研究認(rèn)為卵巢癌組織中GST-π表達(dá)與其鉑類(lèi)耐藥及預(yù)后有關(guān)，GST-π過(guò)度表達(dá)不僅與卵巢癌原發(fā)性耐藥有關(guān)，而且可能與獲得性耐藥有關(guān)^①。本研究結(jié)果表明，從卵巢良性腫瘤到交界性腫瘤再到癌變的過(guò)程中，GST-π陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增加，腫瘤分化程度越低以及臨床分期越晚其表達(dá)越強(qiáng)，這提示可能與GST-π在腫瘤惡性化轉(zhuǎn)變過(guò)程中被誘導(dǎo)激活而獲得較多的表達(dá)量有關(guān)。本研究亦提示GST-π的表達(dá)陽(yáng)性組化療有效率低于表達(dá)陰性組，表明GST-π的表達(dá)可能參與卵巢癌耐藥機(jī)制的調(diào)節(jié)，可作為預(yù)測(cè)化療耐藥和判斷近期療效的一個(gè)有效指標(biāo)。

LRP位于16號(hào)染色體短臂，編碼分子質(zhì)量110kU的LRP，LRP可能參與了胞膜胞質(zhì)物質(zhì)運(yùn)輸通道和胞質(zhì)內(nèi)囊泡的形成，以胞吐方式排出到胞外，降低了細(xì)胞內(nèi)藥物濃度使細(xì)胞產(chǎn)生耐藥。故LRP一般介導(dǎo)對(duì)順鉑、卡鉑、烷化劑等以DNA為靶點(diǎn)藥物的耐藥性。文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)現(xiàn)順鉑誘導(dǎo)耐藥后可上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中LRP的表達(dá)，故LRP可能與卵巢癌順鉑耐藥有重要關(guān)系而決定卵巢癌患者的預(yù)后^②。本研究結(jié)果表明LRP的表達(dá)隨著卵巢上皮癌臨床分期、病理分級(jí)的升高而增加，LRP表達(dá)陽(yáng)性組化療有效率明顯低于陰性組。提示LRP在卵巢癌原發(fā)性耐藥發(fā)生過(guò)程可能發(fā)揮著重要作用，并與預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，卵巢上皮癌組織中存在原發(fā)的多個(gè)耐藥基因的共同表達(dá)現(xiàn)象，如果P-gp、GST-π和LRP在卵巢癌組織中同時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性時(shí)，化療療效差于三者表達(dá)陰性或僅一或兩個(gè)表達(dá)陽(yáng)性者。盡管三者在卵巢癌中存在程度不等的陽(yáng)性表達(dá)率，但由于特異性差，尚不能分別成為評(píng)判化療的單獨(dú)指標(biāo)。只有通過(guò)在卵巢癌組織中進(jìn)行多基因的聯(lián)合檢測(cè)，才能更客觀全面的篩選對(duì)不同耐藥機(jī)制的高效低毒藥物，這有助于指導(dǎo)個(gè)體化化療方案的確定，同時(shí)對(duì)前瞻性?xún)?yōu)化化療藥物、預(yù)測(cè)化療藥物敏感性和判斷化療療效具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值^③。

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